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丁基-瓊脂糖凝膠 H.P.參數(shù)說(shuō)明
中文名：丁基-瓊脂糖凝膠 H.P.
英文名： Butyl -Sepharose H.P.
供應(yīng)商：上海遠(yuǎn)慕
凝膠類(lèi)型：疏水層析填料
粒徑： 45-165μm
工作PH值：3-12
操作溫度：4-40℃
結(jié)構(gòu)成分：4%交聯(lián)瓊脂糖
包裝：25毫升/瓶，100毫升/瓶，大包裝
配基偶聯(lián)量：40μmol phenyl/ml 凝膠
保存條件：4℃
性狀：白色微球，凝膠狀，保存在20%酒精溶液中
應(yīng)用：疏水層析介質(zhì)，適合含芳香族配體蛋白純化，特別適合單抗的純化等。
丁基-瓊脂糖凝膠 H.P.說(shuō)明
丁基-瓊脂糖凝膠 H.P.操作步驟
1、裝柱：
a、讓所有的材料和試劑達(dá)到室溫。配制初始緩沖液(平衡液)和洗脫緩沖液。
b、根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始緩沖液(按凝膠：緩沖液=3：1的比例)配成勻漿。
c、將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一小段液位(液面略高于濾膜)，務(wù)必使底端無(wú)氣泡。
d、用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開(kāi)柱子出液口，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。
e、打開(kāi)蠕動(dòng)泵，讓緩沖液用使用時(shí)流速的1.33倍的流速流過(guò)，使柱床穩(wěn)定。用2~3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。
2、平衡：
讓平衡緩沖液以一定流速流過(guò)柱子，到流出液電導(dǎo)和pH不變。平衡緩沖液一般是高鹽濃度的緩沖液，如0.02~0.05mol/L的PBS加1~2.5mol/L(NH4)2SO4等。
3、上樣：
a、樣品用平衡液配制，渾濁的樣品要離心和過(guò)濾后上樣。
b、一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上，用平衡液洗去雜質(zhì)，再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)品。
c、介質(zhì)對(duì)樣品組分吸附的程度取決于樣品的疏水性質(zhì)、流動(dòng)相的離子強(qiáng)度和溫度。鹽濃度大、溫度高或樣品組分疏水性強(qiáng)，介質(zhì)對(duì)組分吸附牢。
4、洗脫：
疏水介質(zhì)可用減小鹽濃度進(jìn)行洗脫;加表面活性劑或有機(jī)溶劑可加強(qiáng)洗脫;zui常用的洗脫液是低鹽濃度緩沖液，如0.02~0.05mol/L的PBS。
5、再生：
一般用低鹽濃度的緩沖液洗，洗10倍以上柱體積，接著用結(jié)合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用;若有失活蛋白質(zhì)或脂類(lèi)物質(zhì)在再生時(shí)洗不掉，可用在位清洗(CIP)除去。
6、在位清洗：
a、對(duì)于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白，可以用2MNacl去除。
b、對(duì)沉淀蛋白、對(duì)以疏水性結(jié)合的蛋白或脂類(lèi)，可用1MNaOH去除。
c、對(duì)強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂類(lèi)等，用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，但要注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產(chǎn)生氣泡;清洗完畢后，用至少3倍緩沖液平衡柱子。
7、注意在裝柱、使用和保存柱子的時(shí)候，要避免柱子流干，氣泡進(jìn)入。
8、去熱源用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5~6小時(shí)或用0.1M的氫氧化鈉24小時(shí);或用以下方法步驟去除：
a、2倍柱體積的70%乙醇;
b、2倍柱體積50mMTris-HclpH7.5;
c、1倍柱體積4M尿素;
d、3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1MNacl;上緩沖液都在無(wú)熱源的雙蒸水中配制。
9、消毒用0.5~1MNaOH室溫下洗8~10倍柱體積，初始緩沖液平衡柱子。
特別注意：上樣之前，樣品必須去除色素，否則色素會(huì)被吸附到填料上，影響填料的正常使用。
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