沙門氏菌常用培養(yǎng)基的配方及原理
點擊次數(shù)：952 更新時間：2022-08-11
1、沙門氏菌簡介
沙門氏菌病的病原體。屬腸桿菌科，革蘭氏陰性腸道桿菌。已發(fā)現(xiàn)的近一千種（或菌株）。菌體大?。?.6～0.9)×（1～3)微米無芽胞，一般無莢膜，除雞白痢沙門氏菌和雞傷寒沙/門氏菌外，大多有周身鞭毛。營養(yǎng)要求不高，分離培養(yǎng)常采用腸道選擇鑒別培養(yǎng)基。生化反應對本屬菌的鑒別具有重要參考意義。不液化明膠，不分解尿素，不產生吲哚，不發(fā)酵乳糖和蔗糖，能發(fā)酵葡萄糖、甘露/醇、麥芽糖和衛(wèi)芽糖，大多產酸產氣，少數(shù)只產酸不產氣。VP試驗陰性，有賴氨酸脫羧酶。DNA的G+C含量為50～53%。對熱抵抗力不強，在60℃15分鐘可被殺死。在水中存活2～3周。
2、檢測流程見表1
3、培養(yǎng)基原理
微生物檢測培養(yǎng)基
微生物檢測培養(yǎng)基
3.1 緩沖蛋白胨水Buffered Peptone Water
用途：用于沙門氏菌、阪崎桿菌前增菌培養(yǎng)（GB2008標準）
用途：用于沙門氏菌、阪崎桿菌前增菌培養(yǎng)（GB2008標準）
配方：（g/L）
用法：稱取本品20.0g ,加熱溶解于1000ml蒸餾水中,121℃高壓滅菌15分鐘備用。
3.2 四硫磺酸鹽煌綠增菌液基礎(TTB) Tetrathionate Broth Base
用途：用于沙門氏菌選擇性增菌培養(yǎng)，需加入煌綠和碘液。
配方：（g/L）
用法：稱取本品93.55g,溶解于1050ml 蒸餾水中,加熱煮沸,臨用前加入 20% 碘液 20ml,0.5% 煌綠 2ml,現(xiàn)配現(xiàn)用,不宜久置。
3.3 亞/硒酸鹽胱氨/酸增菌液（SC）Selenite Cystine Broth
用途：用于沙門氏菌選擇性增菌培養(yǎng)（GB、SN標準） 。
配方：（g/L）
用法：稱取本品23.0克,加熱溶解于1000ml蒸餾水中,無菌操作分裝于滅菌三角瓶或試管中備用。當天制備當天使用，無需高壓滅菌。
3.4 亞硫酸鉍瓊脂（BS）（GB4789）
3.4 亞硫酸鉍瓊脂（BS）（GB4789）
配方（g/L）：
用法：將前三種成分加入300 ml蒸餾水（制作基礎液），硫/酸亞鐵和磷/酸氫二鈉分別加入20 ml和30 ml蒸餾水中，檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉分別加入另一 20 ml和30 ml蒸餾水中，瓊脂加入 600ml蒸餾水中。然后分別攪拌均勻，煮沸溶解。冷至 80 ℃左右時，先將硫酸/亞鐵和磷酸/氫二鈉混勻，倒入基礎液中，混勻。將檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉混勻，倒入基礎液中，再混勻。調節(jié) pH，隨即傾入瓊脂液中，混合均勻，冷至50 ℃～55 ℃。加入煌綠溶液，充分混勻后立即傾注平皿。
注：本培養(yǎng)基不需要高壓滅菌，在制備過程中不宜過分加熱，避免降低其選擇性，貯于室溫暗處，超過48h會降低其選擇性，本培養(yǎng)基宜于當天制備，第二天使用。
3.5 XLD培養(yǎng)基XyloseLysineDeso
用途：選擇性培養(yǎng)基，主要用于分離志賀氏菌屬，亦可用于分離沙門氏菌。
配方：（g/L）
用法：稱取本品5.7g,加熱攪拌溶解于100ml蒸餾水中,不要過分加熱，冷至 50℃左右時,傾入無菌平皿,部分開蓋干燥 2h,然后蓋上，備用。無需高壓滅菌。在 24小時內使用。
3.6 HE瓊脂
用途：用于沙門氏菌的選擇性分離培養(yǎng)（GB標準）
配方：（g/L）
原理：溴麝香/草酚蘭和酸性復紅為pH指示劑，發(fā)酵糖產酸的菌落呈紅色，不發(fā)酵糖的菌落為藍綠色。
用法：稱取本品 95.8g,加熱溶解于 1000ml 蒸餾水中, 冷至50-55℃時,傾入無菌平皿,本培養(yǎng)基不需要高壓滅菌。
生化培養(yǎng)基。
3.7 三糖鐵（TSI）瓊脂Triple Sugar Iron Agar
用途：生化培養(yǎng)基，用于腸桿菌科細菌的生化反應篩選（GB2008標準）
配方：（g/L）
用法：稱取本品 64.5g,加熱溶解于1000ml 蒸餾水中,加熱煮沸 1分鐘,分裝于 16mm× 150mm試管,121℃高壓滅菌 15 分鐘制成斜面長 4-5cm,底部長2-3cm。
3.8 賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基
用途：用于細菌檢驗中賴氨酸脫羧酶試驗。
配方：（g/L）
用法：除賴氨酸以外的成分加熱溶解后, 分裝每瓶100 ml，分別加入賴氨酸。L- 賴氨酸按0.5％加入， DL-賴氨酸按1 ％加入。調節(jié) pH。對照培養(yǎng)基不加賴氨酸。分裝于無菌的小試管內，每管0.5 ml， 上面滴加一層液體石蠟，115 ℃高壓滅菌 10 min 。
3.9 尿素瓊脂（pH 7.2）
用途：生化培養(yǎng)基，用于細菌脲酶檢測（GB、SN標準）
配方：（g/L）
用法：稱取本品 2.1g,加熱攪拌溶解于 95ml 蒸餾水中,121 ℃高壓滅菌 15 分鐘,冷至 50-55 ℃,加入無菌的 40% 尿素水 5ml, 混勻,分裝試管, 放成斜面?zhèn)溆?。?本批粉末顏色呈粉紅色。
3.10 糖發(fā)酵管
配方：
制法：
①葡萄糖發(fā)酵管按上述成分配好后，調節(jié)pH。按0.5％加入葡萄糖，分裝于有一個倒置小 管的小試管內，121℃高壓滅菌 15 min 。
②其他各種糖發(fā)酵管可按上述成分配好后, 分裝每瓶100 ml，121℃高壓滅菌15 min.另將各種糖類分別配好10％溶液，同時高壓滅菌。將 5 mL糖溶液加入于100 mL培養(yǎng)基內，以無菌操作 分裝小試管。
注：蔗糖不純, 加熱后會自行水解者，應采用過濾法除菌。
試驗方法：從瓊脂斜面上挑取小量培養(yǎng)物接種，于36 ℃±1 ℃培養(yǎng), 一般2d～3d。遲緩反應 需觀察14d ～30d 。
