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bca法測蛋白濃度時,樣品不溶解分析
點擊次數(shù):795 更新時間:2023-09-27

bca法測蛋白濃度時,樣品不溶解時按照以下方法解決操作。

BCA 蛋白定量法是一種快速靈敏、穩(wěn)定可靠的蛋白定量測定方法,其測定范圍是10-2000ug/ml,是比Lowry 法更*的專用于檢測總蛋白質(zhì)含量的產(chǎn)品。

BCA 蛋白定量測定方法:(96孔板)

1、配制BCA 工作液: 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)量,按50 體積試劑A,1 體積試劑B 配制適量BCA 工作液,充分混勻。

2、將蛋白標(biāo)準(zhǔn)品按0, 1, 2, 4, 6,8, 10 微升加到96 孔板的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品孔中,加滅菌雙蒸水補足到10 微升;取10 微升待測樣品加入96 孔板。每個測定要做2-3 個平行。

3、向帶測樣品孔和蛋白標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入200 微升BCA工作液(即樣品與工作液的體積比為1:20)混勻。

4、37℃溫浴30min。冷取至室溫。

5、酶標(biāo)儀562nm 波長下測定吸光度。

6、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,從標(biāo)準(zhǔn)曲線中求出樣品濃度。

BCA 蛋白定量測定操作注意事項:

1、反應(yīng)顏色的深淺除了與樣品的蛋白質(zhì)濃度相關(guān)外,還與反應(yīng)的溫度有關(guān)。如果樣品的濃度較高(>50μg/ml),反應(yīng)溫度一般采用37 度。如果樣品蛋白質(zhì)的濃度較低(<50μg),反應(yīng)的溫度為60℃,該溫度下,色an氨酸、酪氨an酸和肽鍵得到充分氧化,大大提高檢測靈敏度。

2、該方法檢測的蛋白質(zhì)濃度范圍20μg-500μg/ml;當(dāng)?shù)鞍诐舛龋?0ug/ml 時,推薦60℃溫浴,并將蛋白液:工作液的比例調(diào)至1:8 進行測定(增強法)可以檢測到5ug/ml。

試劑A 和B 在室溫的穩(wěn)定期至少1 年以上。標(biāo)準(zhǔn)蛋白液保存在-20℃,短期則4℃保存。



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