無菌無毒的操作環(huán)境和培養(yǎng)環(huán)境是保證細胞在體外培養(yǎng)成功的首要條件。在體外培養(yǎng)的細胞由于缺乏對微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物質污染，或者自身代謝物質積累，可導致細胞中毒死亡。因此，在體外培養(yǎng)細胞時，必須保持細胞生存環(huán)境無菌無毒，及時清除細胞代謝產物。
 

(1)恒定的細胞生長溫度：37℃.(維持培養(yǎng)細胞旺盛生長，必須有恒定適宜的溫度。)

(2)ph ：7.0-7.4 .(過酸或過堿可導致細胞死亡。這主要與蛋白質的變性和細胞膜的結構受損有關。)

(3)滲透壓 ：細胞內外可溶于水的物質比例和種類決定細胞的膨脹與收縮程度，因為細胞膜是半透膜，只允許對自己有利的物質通過。同一物質在細胞內外的分布的數量不同，當某一種極溶于水的物質在細胞外濃度過大時，有可能導致細胞干癟死亡，這些物質在細胞內過多時導致細胞過量吸水膨脹。細胞膜調節(jié)滲透壓的能力是有限的。

(4)營養(yǎng)物 ：營養(yǎng)物和水一起，又叫細胞培養(yǎng)液，培養(yǎng)液中含有細胞增殖和生長所需要的各種物質。營養(yǎng)物包括：n 源、c源，這些物質與提供能量有關；無機鹽、維生素、激素，這些物質與代謝調節(jié)控制有關。細胞培養(yǎng)液的設計一直是細胞離體培養(yǎng)技術的關鍵。理想的細胞培養(yǎng)液可以同時解決細胞離體培養(yǎng)所需要的ph、滲透壓、營養(yǎng)物、調節(jié)物質的全部需要。

(5)水 ：需要經過滅菌鍋滅菌才能放入培養(yǎng)箱水槽

(6)無菌條件 ：與實驗室的硬件設備和個人操作有很大關系。

(7)合適的氣體環(huán)境：氣體是哺乳動物細胞培養(yǎng)生存必需條件之一，所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。動物細胞需要不斷供給氧氣和排除二氧化碳，植物細胞與此相反。