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微生物的糖類發(fā)酵實驗說明 @遠慕新聞
點擊次數(shù):819 更新時間:2020-05-27

糖發(fā)酵試驗是常用的鑒別微生物的生化反應,在腸道細菌的鑒定上尤為重要。絕大多數(shù)細菌都能利用糖類作為碳源和能源,但是它們在分解糖類物質的能力上有很大的差異。有些細菌能分解某種糖產生有機酸(如乳酸、醋酸、丙酸等)和氣體(如氫氣、甲烷、二氧化碳等);有些細菌只產酸不產氣。

不同的細菌可根據(jù)分解利用糖能力的差異表現(xiàn)出是否產酸產氣作為鑒定菌種的依據(jù)。例如大腸桿菌能分解乳糖和葡萄糖產酸并產氣;傷寒桿菌分解葡萄糖產酸不產氣,不能分解乳糖;普通變形桿菌分解葡萄糖產酸產氣,不能分解乳糖。發(fā)酵培養(yǎng)基含有蛋白胨,指示劑(溴甲酚紫),倒置的德漢氏小管和不同的糖類。當發(fā)酵產酸時,溴甲酚紫指示劑可由紫色(pH6.8)變?yōu)辄S色(pH5.2)。氣體的產生可由倒置的德漢氏小管中有無氣泡來證明。
 



糖發(fā)酵試驗通常采用試管、德漢氏小管、試管架及各種糖類試劑等多種試劑和耗材,操作繁瑣,耗時較長。如何能夠簡便試驗流程,節(jié)省時間呢?近年來,HiMedia公司的生產的糖發(fā)酵試劑盒在上悄然流行。

該試劑盒含35項糖發(fā)酵檢查,其中A盒和B盒各含12項糖發(fā)酵試驗,C盒含11項糖發(fā)酵試驗和1個對照試驗,通過微生物發(fā)酵反應,培養(yǎng)基顏色發(fā)生變化。

A盒:乳糖、木糖、麥芽糖、果糖、葡萄糖、半乳糖、棉子糖、海藻糖、蜜二糖、蔗糖、L-阿拉伯糖、甘露糖

B盒:菊粉、葡糖酸鈉、甘油、水楊苷、己六醇、肌醇、山梨醇、甘露醇、核糖醇、阿糖醇、赤藻糖醇、-甲基-D-葡萄糖苷

C盒:鼠李糖、纖維二糖、松三糖、α-甲基-D-甘露糖苷、木糖醇、鄰硝基酚-β半乳糖苷(ONPG)、七葉苷、D-阿拉伯糖、檸檬酸鹽、丙二酸、山梨糖、對照

待鑒定菌種應先進行分離和純化。可在HiMedia營養(yǎng)瓊脂或腦心浸膏瓊脂上挑取一個菌落,接種在5ml腦心浸膏肉湯中,在35-37℃培養(yǎng)4-6小時,直到在620nm處,接種液濁度≥0.5OD。一些苛養(yǎng)菌可能需要孵育超過6小時,以保證接種液濁度達到0.5OD。

無菌打開試劑盒,撕掉封條。每孔接種50μl上述菌液。也可用接種環(huán)劃線。在35±2℃孵育18-24小時即可,顯色結果與《結果詮釋表》、《菌種標準表》比對后,從而對菌種作出鑒定,幾乎包含所有的糖類發(fā)酵實驗,一次性即可出實驗結果,方便快

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